Plásmido CRISPR de Activación (h) α-sarcoglycan: sc-403837-ACT

SGCA codifica la α-sarcoglicana humana, un componente central del subcomplejo de sarcoglicanos dentro del complejo de glicoproteínas asociado a la distrofina, que estabiliza el sarcolema durante la contracción muscular. Al enlazar la matriz extracelular con el citoesqueleto de actina, la α-sarcoglicana contribuye a la integridad de la membrana y a las vías de mecanotransducción esenciales para la resiliencia de las fibras musculares. La pérdida o disfunción de SGCA altera la estabilidad del sarcolema, favoreciendo el daño inducido por la contracción y una homeostasis muscular modificada. Por ello, SGCA se estudia ampliamente en biología del músculo esquelético y cardíaco, ensamblaje de proteínas de membrana y miopatías asociadas al complejo de distrofina.

α-sarcoglycan El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SGCA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

α-sarcoglycan El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SGCA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SGCA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de α-sarcoglycan. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SGCA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de α-sarcoglycan en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía α-sarcoglycan en células tumorales con expresión de SGCA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.