α-S1-casein Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419847

Panoramica

Csn1s1 codifica l’α-S1-caseina murina, una delle principali fosfoproteine secrete del latte, sintetizzata dalle cellule epiteliali mammarie differenziate e confezionata per l’esportazione attraverso la via secretoria RE–Golgi. In quanto componente centrale delle micelle di caseina, l’α-S1-caseina contribuisce all’assemblaggio micellare e alla gestione di calcio/fosfato, favorendo un’efficiente consegna di nutrienti durante l’allattamento. L’espressione di Csn1s1 è fortemente regolata dagli ormoni lattogeni e dai programmi trascrizionali a valle di JAK2/STAT5 e responsivi alla prolattina, che coordinano la differenziazione della ghiandola mammaria. Le alterazioni nella regolazione dei geni delle caseine vengono utilizzate come indicatore dello stato delle cellule epiteliali mammarie, delle risposte allo stress secretorio e dei fenotipi associati alla lattazione, rilevanti nei modelli di ricerca sulla biologia della mammella.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α-S1-casein (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Csn1s1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Csn1s1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Csn1s1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α-S1-casein.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Csn1s1 per lo studio della segnalazione di α-S1-casein, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Csn1s1 critici per la funzione di α-S1-casein
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Csn1s1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α-S1-casein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal α-S1-casein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Csn1s1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α-S1-casein Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR α-S1-casein (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Csn1s1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Csn1s1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.