Plasmide CRISPR d'Activation (h) α-protein kinase 2: sc-414073-ACT

ALPK2 (α-protein kinase 2) est une kinase atypique sérine/thréonine humaine de la famille des α-kinases, caractérisée par la phosphorylation de substrats au sein de régions protéiques structurées plutôt que sur les motifs canoniques reconnus par les kinases. Elle a été associée à la régulation de l’organisation du cytosquelette et de la dynamique de l’adhésion cellulaire, impliquant ALPK2 dans des processus tels que le contrôle de la forme cellulaire, la migration et l’intégrité tissulaire. Par ces fonctions, ALPK2 est étudiée dans des réseaux de signalisation qui coordonnent la mécanotransduction et les réponses cellulaires au stress. Des altérations de l’expression ou de la fonction d’ALPK2 ont été associées, dans des contextes de recherche, à des phénotypes liés au cancer et à d’autres pathologies dans lesquelles une prolifération, une motilité ou une organisation épithéliale dérégulées contribuent à la biologie de la maladie.

α-protein kinase 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ALPK2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

α-protein kinase 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ALPK2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ALPK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de α-protein kinase 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ALPK2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de α-protein kinase 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie α-protein kinase 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ALPK2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.