α Enolase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420178
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- α Enolase El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico α Enolase, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: α Enolase Anticuerpo (9): sc-101513
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
α Enolase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420178 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Eno1 codifica la α-enolasa, una metaloenzima conservada que cataliza la conversión de 2-fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato en la glucólisis, favoreciendo la generación de ATP y el flujo de carbono bajo diversas condiciones nutricionales. Más allá de su función metabólica canónica, ENO1 contribuye a una reprogramación metabólica más amplia y puede influir en el equilibrio redox, la adaptación a la hipoxia y las respuestas al estrés celular mediante su impacto en el flujo glucolítico. Las alteraciones en la expresión y la actividad de ENO1 se han asociado con fenotipos proliferativos e inflamatorios, y se estudia con frecuencia en contextos donde el metabolismo energético se cruza con la señalización oncogénica y la función de las células inmunitarias. En sistemas murinos, Eno1 sirve como un nodo manejable para diseccionar mecanismos ligados a la glucólisis que modulan el crecimiento celular, la migración y las respuestas a señales del microambiente.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO α Enolase (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Eno1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Eno1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Eno1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína α Enolase.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Eno1 para la investigación de la señalización de α Enolase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Eno1 críticos para la función de α Enolase
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Eno1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido α Enolase CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido α Enolase CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Eno1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR α Enolase (m) y el plásmido HDR α Enolase (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Eno1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Eno1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.