Plasmide CRISPR d'Activation (m) α Enolase: sc-420178-ACT

L’Eno1 de la souris code l’α‑énolase, une métalloenzyme glycolytique qui catalyse l’interconversion du 2‑phosphoglycérate et du phosphoénolpyruvate, reliant le métabolisme central du carbone à l’homéostasie énergétique cellulaire. Au‑delà de la glycolyse, l’α‑énolase peut, selon le contexte subcellulaire, influencer la liaison au plasminogène, les réponses au stress et des fonctions associées à l’ARN, établissant un lien entre l’état métabolique et la dynamique du cytosquelette ainsi que la signalisation. Des altérations de l’activité et de l’expression d’ENO1 sont fréquemment associées à une reprogrammation métabolique et à des microenvironnements inflammatoires, ce qui soutient sa pertinence pour l’étude de la prolifération, des réponses à l’hypoxie et de la modulation immunitaire dans des modèles de maladie. Dans les systèmes murins, Eno1 est couramment étudié dans les voies qui régissent l’utilisation du glucose, l’équilibre rédox et les réponses adaptatives au stress nutritionnel.

α Enolase Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Eno1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

α Enolase Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Eno1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Eno1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de α Enolase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Eno1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de α Enolase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie α Enolase dans les cellules tumorales présentant une expression de Eno1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.