α-defensin 4 Double Nickase Plasmid (h): sc-407288-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α-defensin 4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α-defensin 4 Double-Nickase-Plasmid (h) und α-defensin 4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DEFA4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α-defensin 4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407288-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α-defensin 4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407288-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DEFA4 kodiert das humane α-Defensin 4, ein kationisches antimikrobielles Peptid, das in neutrophilen Granula angereichert ist und zur angeborenen Immunabwehr an mukosalen und epithelialen Grenzflächen beiträgt. Nach der Freisetzung im Rahmen der Degranulation oder NET-assoziierter Antworten kann α-Defensin 4 mikrobielle Membranen direkt schädigen und lokale inflammatorische Signalwege durch Interaktionen mit pathogenassoziierten molekularen Mustern sowie Rezeptoren von Wirtszellen modulieren. Seine Aktivität überschneidet sich mit neutrophilen Effektorprogrammen, Chemotaxis und Zytokinnetzwerken, die frühe Wirt–Pathogen-Interaktionen prägen. Veränderte Defensin-Expression und eine Dysregulation von Neutrophilen wurden im Kontext entzündlicher Erkrankungen und infektionsassoziierter Immunphänotypen untersucht, was DEFA4 als Marker und mechanistischen Knotenpunkt in der Forschung zur angeborenen Immunität stützt.
α-defensin 4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DEFA4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DEFA4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DEFA4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DEFA4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.