Plasmide Double Nickase (h) α/β-dystroglycan: sc-417547-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) α/β-dystroglycan correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide α/β-dystroglycan Double Nickase (h) et le plasmide α/β-dystroglycan Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DAG1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: α-dystroglycan Antibody (IIH6): sc-53987
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) α/β-dystroglycan | sc-417547-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) α/β-dystroglycan | sc-417547-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DAG1 code le dystroglycane, un récepteur de surface cellulaire liant la laminine, qui est maturé après la traduction en α-dystroglycane et β-dystroglycane, puis assemblé au sein du complexe dystrophine–glycoprotéines. Ce complexe relie la matrice extracellulaire au cytosquelette d’actine, soutenant l’organisation de la lame basale, la stabilité membranaire et la mécanotransduction dans le muscle squelettique et d’autres tissus. La fonction du dystroglycane est étroitement liée à la liaison aux ligands et à la signalisation au niveau des sites d’adhérence, dépendantes de la glycosylation, intégrant les signaux de la matrice extracellulaire au remodelage du cytosquelette. Une altération de l’expression de DAG1 ou du processing/de la glycosylation du dystroglycane est associée aux dystroglycanopathies et à des phénotypes neuromusculaires apparentés, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude des interactions cellule–matrice et de l’intégrité tissulaire.
α/β-dystroglycan Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DAG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DAG1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DAG1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DAG1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.