α-actinin-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401186

Descripción general

ACTN2 codifica la α-actinina-2, una proteína de unión a actina modulada por Ca2+ que entrecruza la actina filamentosa y ancla las redes del citoesqueleto a estructuras de adhesión y contráctiles. En el músculo estriado, la α-actinina-2 es un componente central del disco Z que organiza la arquitectura del sarcómero y favorece la transmisión de fuerza mediante interacciones con la actina, complejos asociados a la titina y otras proteínas de andamiaje. Además de sus funciones estructurales, ACTN2 contribuye a vías de mecanotransducción y remodelación del citoesqueleto que influyen en la tensión celular, la señalización en el costámero y el ensamblaje de miofibrillas. La alteración genética o las variaciones en ACTN2 se han asociado con fenotipos de miocardiopatía y con una función muscular modificada, lo que la hace relevante para estudios sobre la integridad del sarcómero y la señalización sensible al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO α-actinin-2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ACTN2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ACTN2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ACTN2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína α-actinin-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ACTN2 para la investigación de la señalización de α-actinin-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ACTN2 críticos para la función de α-actinin-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ACTN2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido α-actinin-2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido α-actinin-2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ACTN2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR α-actinin-2 (h) y el plásmido HDR α-actinin-2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ACTN2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ACTN2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.