αA-crystallin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419820

Descripción general

Cryaa codifica la αA-cristalina, una pequeña proteína de choque térmico muy abundante en el cristalino ocular que actúa como chaperona molecular independiente de ATP para mantener la solubilidad de las cristalinas y prevenir la agregación proteica bajo condiciones de estrés. Más allá de su función estructural en el establecimiento de la transparencia del cristalino y de sus propiedades refractivas, la αA-cristalina contribuye a la proteostasis al interactuar con proteínas cliente mal plegadas y modular redes de respuesta al estrés vinculadas al equilibrio redox y la apoptosis. La alteración de la expresión o la función de CRYAA se asocia con disfunción de las células de las fibras del cristalino, desregulación de la homeostasis proteica y fenotipos relacionados con cataratas, lo que la convierte en un nodo clave para estudiar el desarrollo del cristalino y los procesos de agregación proteica asociados al envejecimiento. En sistemas murinos, la perturbación de Cryaa sustenta estudios mecanísticos sobre la actividad chaperona, la organización del citoesqueleto y la resiliencia al estrés en células epiteliales y fibras del cristalino.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO αA-crystallin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cryaa en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cryaa junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cryaa tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína αA-crystallin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cryaa para la investigación de la señalización de αA-crystallin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cryaa críticos para la función de αA-crystallin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cryaa para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido αA-crystallin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido αA-crystallin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cryaa. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR αA-crystallin (m) y el plásmido HDR αA-crystallin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cryaa para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cryaa definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.