Plásmido CRISPR de Activación (h) α8 Tubulin: sc-400076-ACT

TUBA8 codifica la tubulina α8, un miembro de la familia de las α-tubulinas que forma heterodímeros con la β-tubulina para constituir microtúbulos, los cuales sustentan la arquitectura del citoesqueleto, el transporte intracelular y la organización del huso mitótico. Mediante la regulación de la dinámica de los microtúbulos, la tubulina α8 contribuye a procesos como la división celular, la polaridad y el tráfico vesicular, interactuando con proteínas asociadas a microtúbulos y complejos motores. La expresión alterada de isotipos de tubulina y la remodelación de los microtúbulos se asocian con proliferación desregulada y organización celular aberrante en enfermedades humanas, lo que convierte a TUBA8 en un objetivo útil para estudios mecanísticos del control del citoesqueleto. TUBA8 también es relevante para investigar cómo la composición de tubulina influye en la estabilidad de los microtúbulos y en las respuestas de señalización ante perturbaciones del citoesqueleto.

α8 Tubulin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TUBA8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

α8 Tubulin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TUBA8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TUBA8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de α8 Tubulin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TUBA8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de α8 Tubulin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía α8 Tubulin en células tumorales con expresión de TUBA8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.