Plásmido CRISPR de Activación (h) α3e Tubulin: sc-400023-ACT

TUBA3E codifica la tubulina α3e, una subunidad con unión a β-tubulina que polimeriza para formar microtúbulos, sustentando la arquitectura del citoesqueleto, el transporte intracelular y la formación y función del huso mitótico. Como componente central de la red de microtúbulos, la tubulina α3e contribuye a procesos como la progresión del ciclo celular, el posicionamiento de orgánulos y el crecimiento de neuritas mediante el ensamblaje y remodelación dinámicos de los microtúbulos. Los isotipos de tubulina pueden modular la estabilidad de los microtúbulos y sus interacciones con proteínas asociadas a microtúbulos y complejos motores, influyendo en vías que regulan la proliferación y la polaridad celular. La dinámica desregulada de los microtúbulos y los patrones alterados de expresión de tubulina se asocian con frecuencia a inestabilidad cromosómica y a una división celular aberrante observada en múltiples contextos patológicos, lo que respalda estudios mecanísticos sobre la regulación del citoesqueleto.

α3e Tubulin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TUBA3E sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

α3e Tubulin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TUBA3E en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TUBA3E, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de α3e Tubulin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TUBA3E y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de α3e Tubulin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía α3e Tubulin en células tumorales con expresión de TUBA3E silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.