Plásmido Doble Nickase (h) α3d Tubulin: sc-400024-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)α3d Tubulin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa α3d Tubulin (h) y el plásmido de doble nickasa α3d Tubulin (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TUBA3D. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) α3d Tubulin | sc-400024-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) α3d Tubulin | sc-400024-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBA3D codifica la tubulina α3d, una subunidad estructural de los microtúbulos que se asocia con la β-tubulina y que sustenta la organización del citoesqueleto, el transporte intracelular y el ensamblaje del huso mitótico. Como parte del conjunto de heterodímeros de tubulina, la tubulina α3d contribuye a la inestabilidad dinámica de los microtúbulos que sirve de base para la división celular, la polaridad y el tráfico vesicular, interactuando con vías reguladas por proteínas asociadas a microtúbulos y por complejos motores como las quinesinas y la dineína. Las alteraciones en la expresión de isotipos de tubulina y en la regulación de los microtúbulos son ampliamente relevantes para la aneuploidía, la inestabilidad cromosómica y los cambios en la motilidad celular, procesos que se estudian con frecuencia en biología del cáncer y en contextos del neurodesarrollo. Por ello, TUBA3D constituye una diana útil para analizar fenotipos dependientes de microtúbulos, la remodelación del citoesqueleto y la progresión del ciclo celular en sistemas celulares humanos.
α3d Tubulin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TUBA3D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TUBA3D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TUBA3D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TUBA3D alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.