Plásmido CRISPR de Activación (h) α3d Tubulin: sc-400024-ACT

TUBA3D codifica la tubulina humana α3d, un componente central de los microtúbulos que sostiene la arquitectura del citoesqueleto, el tráfico intracelular y el ensamblaje del huso mitótico. Como parte del ciclo de polimerización de la tubulina, los heterodímeros de α/β-tubulina permiten la inestabilidad dinámica necesaria para la división celular, el crecimiento de prolongaciones neuronales y el transporte polarizado. La remodelación de los microtúbulos se integra con vías que controlan la función del centrosoma, la segregación cromosómica y procesos relacionados con los cilios, lo que vincula la regulación de la tubulina con la estabilidad del genoma y las decisiones sobre el destino celular. La dinámica microtubular desregulada y los patrones alterados de expresión de tubulina se asocian con frecuencia a fenotipos proliferativos y del neurodesarrollo, y son ampliamente relevantes para los mecanismos que subyacen a la inestabilidad cromosómica en modelos de cáncer.

α3d Tubulin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TUBA3D sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

α3d Tubulin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TUBA3D en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TUBA3D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de α3d Tubulin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TUBA3D y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de α3d Tubulin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía α3d Tubulin en células tumorales con expresión de TUBA3D silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.