Plásmido CRISPR de Activación (h) α1b Tubulin: sc-400021-ACT

TUBA1B codifica la tubulina humana α1b, un isotipo central de α-tubulina que forma heterodímeros con la β-tubulina para construir microtúbulos, proporcionando un soporte estructural esencial para el transporte intracelular, la polaridad celular y el ensamblaje del huso mitótico. La remodelación dinámica de los microtúbulos regula procesos que incluyen el tráfico vesicular, la ciliogénesis y la segregación cromosómica, mediante una regulación coordinada por proteínas asociadas a microtúbulos y modificaciones postraduccionales de la tubulina. La alteración de la homeostasis de la tubulina puede modificar la organización del citoesqueleto, la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés, vinculando la biología de la tubulina con la señalización proliferativa y la adaptación celular. Como componente del citoesqueleto ampliamente expresado, la tubulina α1b se utiliza con frecuencia para estudiar la dinámica de los microtúbulos y fenotipos dependientes del citoesqueleto relevantes para el comportamiento de células cancerosas y la biología del neurodesarrollo.

α1b Tubulin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TUBA1B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

α1b Tubulin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TUBA1B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TUBA1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de α1b Tubulin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TUBA1B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de α1b Tubulin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía α1b Tubulin en células tumorales con expresión de TUBA1B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.