Plásmido Doble Nickase (h) α1a Tubulin: sc-400022-NIC

TUBA1A codifica la tubulina α1a, un componente central de los microtúbulos que se polimerizan formando filamentos dinámicos necesarios para la formación del huso mitótico, el tráfico intracelular y el mantenimiento de la polaridad celular. La tubulina α1a favorece la remodelación del citoesqueleto y los procesos dependientes de microtúbulos a lo largo del ciclo celular, lo que permite una segregación cromosómica adecuada y la morfogénesis neuronal. La alteración de la función de TUBA1A se asocia con una dinámica de microtúbulos perturbada y un desarrollo cortical anómalo, por lo que es relevante en estudios de trastornos del neurodesarrollo y de desregulación del citoesqueleto. Como una de las principales isoformas de α-tubulina en humanos, se utiliza con frecuencia para estudiar el ensamblaje y la estabilidad de los microtúbulos, así como sus interacciones con proteínas asociadas a microtúbulos y complejos motores.

α1a Tubulin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TUBA1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TUBA1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TUBA1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TUBA1A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.