ZUFSP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-415124-ACT

O ZUFSP humano codifica uma enzima desubiquitinante contendo dedo de zinco que regula o controle de qualidade proteico dependente de ubiquitina ao clivar ligações específicas em cadeias de ubiquitina. Contribui para a proteostase e para a sinalização responsiva ao estresse ao remodelar marcas de ubiquitina que governam a degradação de proteínas, as respostas a danos no DNA e a homeostase de organelos. A atividade do ZUFSP interage com a dinâmica do sistema ubiquitina–proteassoma e pode influenciar os resultados de vias controladas pela ubiquitinação, incluindo a progressão do ciclo celular e programas de estabilidade genômica. A edição desregulada de ubiquitina está amplamente implicada na biologia do câncer e na neurodegeneração, tornando o ZUFSP um nó útil para estudos mecanísticos da sinalização por ubiquitina em células humanas.

ZUFSP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZUFSP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZUFSP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZUFSP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZUFSP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZUFSP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZUFSP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZUFSP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZUFSP em células tumorais com expressão de ZUFSP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.