Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZRSR2 (m): sc-423571

Présentation

Zrsr2 code pour ZRSR2, une protéine de liaison à l’ARN à doigt de zinc qui constitue un composant central du spliceosome et joue un rôle majeur dans la reconnaissance et l’excision des introns de type U12. En régulant la fidélité de l’épissage du pré‑ARNm, ZRSR2 influence le choix des isoformes de transcrits ainsi que l’expression de gènes impliqués dans le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation et les réponses au stress. La perturbation de l’activité du spliceosome mineur dépendante de ZRSR2 peut entraîner une rétention anormale d’introns et des défauts étendus de maturation de l’ARN, reliant cette voie à des programmes hématopoïétiques et immunitaires altérés dans des contextes pertinents pour la maladie. En tant que facteur d’épissage conservé, ZRSR2 chez la souris est utile pour des études mécanistiques de l’assemblage du spliceosome, de la biologie des introns mineurs et du remodelage du protéome en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZRSR2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Zrsr2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Zrsr2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Zrsr2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZRSR2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Zrsr2 pour l'étude de la signalisation de ZRSR2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Zrsr2 essentiels à la fonction de ZRSR2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Zrsr2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZRSR2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ZRSR2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Zrsr2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZRSR2 plasmide HDR (m) et le ZRSR2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Zrsr2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Zrsr2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.