ZPR1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423774-ACT

ZPR1 (Zinkfingerprotein ZPR1) ist ein evolutionär konserviertes RNA-bindendes Protein mit Zinkfinger-Domänen, das mit der Transkriptionskontrolle, dem RNA-Stoffwechsel und wachstumsfaktorresponsiver Signalübertragung in Verbindung gebracht wird. In Mauszellen ist ZPR1 an nukleo-zytoplasmatischem Transport beteiligt und assoziiert mit RNA-Verarbeitungskomplexen, wodurch mitogene Signale mit Genexpressionsprogrammen verknüpft werden, die Proliferation und zelluläre Stressantworten unterstützen. Funktionsstudien stellen einen Zusammenhang zwischen ZPR1 und der Motoneuronbiologie sowie für spinale Muskelatrophie relevanten Signalwegen her – über die Beziehung zu SMN-assoziierter Ribonukleoproteinassemblierung und der Dynamik des RNA-Spleißens. Eine Fehlregulation ZPR1-abhängiger RNA-Regulationsnetzwerke ist daher für die Modellierung von Neurodegeneration und für mechanistische Studien zur Kopplung von Transkription und RNA-Verarbeitung von Interesse.

ZPR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Zpr1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZPR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Zpr1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Zpr1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZPR1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Zpr1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZPR1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZPR1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Zpr1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.