Plasmide Double Nickase (h) ZO-1: sc-400196-NIC

TJP1 code pour la protéine d'échafaudage des jonctions serrées ZO‑1, un adaptateur multidomaine qui relie les claudines et l'occludine au cytosquelette cortical d'actine afin d'organiser l'architecture des barrières épithéliales et endothéliales. ZO‑1 coordonne l'assemblage des jonctions, la mécanotransduction et le remodelage du cytosquelette via des interactions avec des complexes de signalisation et de polarité, en intégrant des processus tels que l'adhésion cellule‑cellule, le contrôle de la perméabilité et la régulation de la croissance dépendante du contact. Une perturbation de l'expression ou de la localisation de TJP1 est associée à une désorganisation des jonctions serrées et à une modification du transport paracellulaire, des phénomènes fréquemment observés lors de l'inflammation, de la fibrose et de la dissémination tumorale. En tant que régulateur central de la stabilité jonctionnelle, ZO‑1 est largement étudiée dans les voies qui gouvernent l'intégrité des barrières et les dynamiques épithélio‑mésenchymateuses.

ZO-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TJP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TJP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TJP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TJP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.