Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZnT-10 (h): sc-403451

Présentation

SLC30A10 code pour ZnT-10, un membre de la famille SLC30 de transporteurs de métaux qui régule l’homéostasie intracellulaire des cations divalents, avec un rôle clé dans l’efflux et la compartimentation du manganèse. En contrôlant les niveaux cellulaires de manganèse, ZnT-10 influence la fonction des métalloprotéines, les réponses au stress oxydatif et les processus de signalisation en aval sensibles à l’activité enzymatique dépendante des métaux. La dérégulation de SLC30A10 est associée à une accumulation anormale de manganèse et à une altération de la gestion des métaux, susceptibles de perturber la physiologie hépatique et neurologique. Par conséquent, ZnT-10 est étudiée dans des voies reliant le transport des métaux, la fonction mitochondriale et l’adaptation cellulaire au stress dans des modèles cellulaires humains pertinents.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZnT-10 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC30A10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC30A10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC30A10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZnT-10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC30A10 pour l'étude de la signalisation de ZnT-10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC30A10 essentiels à la fonction de ZnT-10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC30A10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZnT-10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZnT-10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC30A10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZnT-10 plasmide HDR (h) et le ZnT-10 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC30A10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC30A10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.