ZnT-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403094-ACT

SLC30A1 kodiert ZnT-1, einen Zink‑Efflux‑Transporter, der überwiegend an der Plasmamembran lokalisiert ist und die zytosolische Zinkhomöostase aufrechterhält, indem er Zn2+ exportiert und so die intrazelluläre Zinktoxizität begrenzt. Durch die Regulation labiler Zinkpools beeinflusst ZnT-1 metallabhängige Signalwege, Reaktionen auf oxidativen Stress sowie die Aktivität zinkabhängiger Enzyme und Transkriptionsfaktoren und wirkt dadurch auf umfassendere Proteostase‑ und stressadaptive Signalwege. Eine veränderte Zinkhandhabung und SLC30A1‑Expression wurden mit der zellulären Anfälligkeit für Metallüberladung und Redox‑Ungleichgewichte in Verbindung gebracht – Prozesse, die an Neurodegeneration, Entzündung und krebsassoziierten Phänotypen beteiligt sind. Als Gatekeeper des Zinkflusses wird ZnT-1 häufig in Modellen für Metallstress, Transporter‑Crosstalk und Signalwege untersucht, die die Verfügbarkeit von Mikronährstoffen mit der Genregulation koppeln.

ZnT-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC30A1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZnT-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC30A1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC30A1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZnT-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC30A1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZnT-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZnT-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC30A1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.