ZNRF3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418162

Übersicht

ZNRF3 (Zink- und Ringfingerprotein 3) kodiert eine transmembranäre E3-Ubiquitin-Ligase, die als negativer Feedback-Regulator der Wnt/β-Catenin-Signalübertragung wirkt, indem sie die Ubiquitinierung und den Abbau von Frizzled- und LRP5/6-Rezeptorkomplexen an der Zelloberfläche fördert. Über Interaktionen mit R-Spondinen und LGR-Rezeptoren trägt ZNRF3 dazu bei, die Signalstärke des Signalwegs zu justieren, und beeinflusst dadurch die Aufrechterhaltung von Stammzellen, die Gewebehomöostase und Differenzierungsprogramme. Eine Störung der ZNRF3-vermittelten Rezeptorregulation kann die Wnt-Signalgebung verstärken und die Transkriptionsausgänge verändern, die Proliferation und Linienfestlegung steuern. Genetische und funktionelle Veränderungen in ZNRF3 wurden mit der Wnt-abhängigen Krankheitsbiologie in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Kontrolle dieses Signalwegs macht.

Das ZNRF3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ZNRF3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ZNRF3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ZNRF3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZNRF3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ZNRF3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZNRF3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ZNRF3-Exone abzielen, die für die ZNRF3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ZNRF3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZNRF3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ZNRF3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ZNRF3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZNRF3 HDR-Plasmid (h) und ZNRF3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ZNRF3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ZNRF3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.