ZNRF1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-431297-LAC

Znrf1 kodiert ZNRF1, eine RING-Typ-E3-Ubiquitin-Ligase, die den Proteinumsatz durch Ubiquitinierung und proteasomenabhängigen Abbau reguliert. In Neuronen und anderen Zelltypen wird ZNRF1 mit stressresponsiver Signalübertragung in Verbindung gebracht, die die Axonintegrität, das Neuriten-Remodeling und Reaktionen auf zelluläre Schädigung beeinflusst. Durch die Modulation ubiquitinabhängiger Qualitätskontrollwege kann ZNRF1 die Zytoskelettdynamik und nachgeschaltete Signalnetzwerke prägen, die mit Neurodegeneration und verletzungsassoziierten Degenerationsmodellen verknüpft sind. Studien zu murinem ZNRF1 stützen seine Relevanz für die Untersuchung der Regulation von Ubiquitin-Signalwegen in der Entwicklung des Nervensystems und in krankheitsassoziierten zellulären Stressphänotypen.

ZNRF1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Znrf1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ZNRF1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Znrf1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ZNRF1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Znrf1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.