Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZNF831: sc-414334-ACT

ZNF831 (protéine à doigts de zinc 831) est un facteur de transcription humain à doigts de zinc de type C2H2 impliqué dans la régulation de programmes d’expression génique qui façonnent la fonction et la différenciation des cellules immunitaires. Il participe au contrôle transcriptionnel et à des processus associés à la chromatine qui influencent la signalisation des cytokines et l’activation des lymphocytes, en s’intégrant à des voies plus larges régissant les réponses immunitaires adaptatives. Des études génétiques ont associé des variations situées à proximité de ZNF831 à des traits à médiation immunitaire et à la susceptibilité aux maladies auto-immunes, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude des réseaux régulateurs sous-jacents aux phénotypes inflammatoires. En tant que protéine nucléaire se liant à l’ADN, ZNF831 constitue un outil utile pour explorer les circuits transcriptionnels et l’architecture de la régulation génique dans des systèmes modèles hématopoïétiques et immunitaires.

ZNF831 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZNF831 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZNF831 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZNF831 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZNF831, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZNF831. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZNF831 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZNF831 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZNF831 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZNF831 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.