Particules Lentivirales d'Activation (h) ZNF71: sc-410081-LAC

ZNF71 code une protéine à doigts de zinc contenant un domaine KRAB, qui agit comme régulateur transcriptionnel spécifique de séquence, généralement en coopération avec la machinerie de remodelage de la chromatine associée à KAP1/TRIM28 afin de former de l’hétérochromatine répressive et d’ajuster finement les programmes d’expression génique. En tant que membre du réseau plus large des protéines à doigts de zinc C2H2, ZNF71 est impliqué dans le contrôle des états de différenciation cellulaire, le silençage épigénétique d’éléments répétitifs et le maintien de l’homéostasie transcriptionnelle. La dérégulation des facteurs KRAB-ZNF est fréquemment étudiée dans le contexte des paysages transcriptionnels altérés observés dans le cancer et d’autres troubles caractérisés par une instabilité épigénétique, ce qui fait de ZNF71 un nœud pertinent pour l’étude des circuits de facteurs de transcription. Les travaux sur ZNF71 recoupent souvent les voies qui régulent l’accessibilité de la chromatine, la régulation des promoteurs et des enhancers, ainsi que la répression ou l’activation génique dépendante du contexte.

Les particules d'activation lentivirales ZNF71 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ZNF71 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ZNF71 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ZNF71, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ZNF71. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ZNF71 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.