ZNF649 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418512-ACT

ZNF649 kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor vom C2H2-Typ, der an der sequenzspezifischen DNA-Bindung und der Regulation von Genexpressionsprogrammen beteiligt ist, die die zelluläre Identität und chromatinassoziierte Prozesse beeinflussen. Als nukleäres Regulationsprotein wird ZNF649 häufig im Kontext breiterer, mit KRAB-Zinkfingern verknüpfter Netzwerke betrachtet, die die Dynamik von Transkriptionsrepression und -aktivierung modulieren und dadurch potenziell den Zellzyklus, die Differenzierung und Stressantwort-Signalwege beeinflussen. Eine veränderte Regulation von Zinkfinger-Transkriptionsfaktoren wurde mit fehlgesteuerten Transkriptionsschaltkreisen bei Krebs und anderen Erkrankungen in Verbindung gebracht, die durch eine abnorme epigenetische Kontrolle gekennzeichnet sind, was ZNF649 für mechanistische Studien der transkriptionellen Homöostase relevant macht. Die Untersuchung der ZNF649-Aktivität kann dazu beitragen zu klären, wie promotor- und enhancerassoziierte Bindungsereignisse nachgeschaltete Signalwege und genregulatorische Netzwerke in menschlichen Zellen formen.

ZNF649 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZNF649-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZNF649 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZNF649-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZNF649-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZNF649-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZNF649-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZNF649-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZNF649-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZNF649-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.