ZNF575 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430383

Übersicht

Das murine Gen Zfp575 kodiert das Zinkfingerprotein ZNF575, einen mutmaßlich DNA-bindenden transkriptionellen Regulator aus der Familie der C2H2-Zinkfinger, die häufig mit der sequenzspezifischen Kontrolle der Genexpression in Verbindung gebracht wird. Obwohl die funktionelle Annotation bislang begrenzt ist, modulieren Proteine dieser Klasse typischerweise chromatinassoziierte Transkriptionsprogramme, die den Zellzustand, die Differenzierung sowie Reaktionen auf entwicklungsbedingte oder umweltbedingte Reize beeinflussen. ZNF575 ist daher für die Untersuchung genregulatorischer Netzwerke und epigenetischer Mechanismen relevant, die eine gewebespezifische Transkription prägen. Eine Fehlregulation der zinkfingervermittelten Transkriptionskontrolle ist allgemein mit veränderter Proliferation, Genomstabilität und krankheitsassoziierten Expressionssignaturen verbunden, was explorative Studien zu Zfp575 in diesen Kontexten unterstützt.

Das ZNF575 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Zfp575-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Zfp575-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Zfp575 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZNF575-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Zfp575-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZNF575-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Zfp575-Exone abzielen, die für die ZNF575-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Zfp575-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZNF575 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ZNF575 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Zfp575-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZNF575 HDR-Plasmid (m) und ZNF575 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Zfp575-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Zfp575-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.