ZNF526 Double Nickase Plasmid (m): sc-431684-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ZNF526 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ZNF526 Double-Nickase-Plasmid (m) und ZNF526 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Zfp526 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ZNF526 Double Nickase Plasmid (m) | sc-431684-NIC | 20 µg | $410.00 |
Zfp526 kodiert das murine Zinkfingerprotein ZNF526, einen mutmaßlichen nukleären DNA-bindenden Faktor, der über sequenzspezifische Wechselwirkungen mit Chromatin an der Transkriptionsregulation beteiligt ist. Als Protein mit mehreren C2H2-Zinkfinger-Domänen dürfte ZNF526 an genregulatorischen Netzwerken mitwirken, die die Aufrechterhaltung des Zellzustands, die Festlegung von Zelllinien und kontextabhängige Transkriptionsprogramme beeinflussen. Eine Modulation der zinkfingervermittelten Transkriptionskontrolle greift in Signalwege der epigenetischen Regulation und der Entwicklungssteuerung ein, wodurch Zfp526 ein nützliches Ziel für die Untersuchung der Robustheit der Genexpression und der regulatorischen Architektur darstellt. Eine Fehlregulation von Zinkfinger-Transkriptionsfaktoren ist in krankheitsrelevanten Modellen häufig mit veränderter Differenzierung und proliferativen Phänotypen assoziiert, was mechanistische Untersuchungen von Zfp526 im Kontext der zellulären Homöostase unterstützt.
ZNF526 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Zfp526-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Zfp526 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Zfp526-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Zfp526-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.