ZNF282 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409149-ACT

ZNF282 codifica um fator de transcrição do tipo dedo de zinco, implicado na ligação ao DNA de forma específica por sequência e na regulação de programas de expressão gênica que influenciam o estado celular e a diferenciação. Como proteína reguladora nuclear, o ZNF282 está associado a processos de controle transcricional coordenados pela RNA polimerase II e por cofatores associados à cromatina, sustentando a ativação ou repressão dependente do contexto de alvos a jusante. Alterações na expressão de ZNF282 foram relatadas em estudos transcriptômicos e funcionais em múltiplos contextos de câncer, em consonância com papéis na proliferação, em redes gênicas associadas à invasão e em respostas ao estresse celular. Essas características tornam o ZNF282 um nó útil para investigar circuitos transcricionais, regulação epigenética e reconfiguração de vias em células humanas.

ZNF282 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZNF282 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZNF282 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZNF282 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZNF282, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZNF282. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZNF282 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZNF282 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZNF282 em células tumorais com expressão de ZNF282 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.