ZNF282 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-409149-ACT

ZNF282 kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an der sequenzspezifischen DNA-Bindung sowie an der Regulation von Genexpressionsprogrammen beteiligt ist, die den Zellzustand und die Differenzierung beeinflussen. Als nukleäres regulatorisches Protein ist ZNF282 mit transkriptionellen Kontrollprozessen assoziiert, die von der RNA-Polymerase II und chromatinassoziierten Kofaktoren koordiniert werden, und unterstützt dadurch eine kontextabhängige Aktivierung oder Repression nachgeschalteter Zielgene. Eine veränderte ZNF282-Expression wurde in transkriptomischen und funktionellen Studien in mehreren Krebs-Kontexten beschrieben, was mit Rollen in Proliferation, invasionsassoziierten Gennetzwerken und zellulären Stressantworten vereinbar ist. Diese Eigenschaften machen ZNF282 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um transkriptionelle Schaltkreise, epigenetische Regulation und Pathway-Rewiring in menschlichen Zellen zu untersuchen.

ZNF282 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZNF282-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZNF282 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZNF282-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZNF282-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZNF282-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZNF282-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZNF282-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZNF282-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZNF282-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.