ZIP4 Double Nickase Plasmid (m): sc-428200-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ZIP4 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ZIP4 Double-Nickase-Plasmid (m) und ZIP4 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Slc39a4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ZIP4 Double Nickase Plasmid (m) | sc-428200-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Slc39a4 kodiert ZIP4, einen Zinkimporter der Plasmamembran, der die zelluläre Zinkaufnahme reguliert und dadurch die Aktivität zinkabhängiger Enzyme, die Funktion von Transkriptionsfaktoren und die Redox-Homöostase unterstützt. ZIP4 trägt zur Nährstoffaufnahme im Epithel und zu Differenzierungsprogrammen bei und verknüpft so die Zinkverfügbarkeit mit proliferativen Signalwegen und Stressantwort-Signalwegen. Eine dysregulierte ZIP4-Aktivität stört die Zinkhomöostase und kann die Barrierefunktion sowie inflammatorische Signalübertragung verändern, wodurch Slc39a4 einen nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung des Metallionentransports in der Stoffwechsel- und Epithelbiologie darstellt. Da Zink ein kritischer Kofaktor für viele DNA-bindende Proteine und Reparaturenzyme ist, kann ein ZIP4-abhängiger Zinkfluss auch Prozesse der Genomerhaltung beeinflussen, die in Modellsystemen für Krankheitsphänotypen relevant sind.
ZIP4 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Slc39a4-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Slc39a4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Slc39a4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Slc39a4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.