Zic2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404720

Übersicht

ZIC2 kodiert den Zinkfinger-Transkriptionsfaktor Zic2, einen zentralen Regulator der embryonalen Musterbildung und der neuronalen Entwicklung, der Genexpressionsprogramme moduliert, welche die Festlegung des Zellschicksals, Proliferation und Differenzierung steuern. Zic2 wirkt innerhalb entwicklungsbiologischer Transkriptionsnetzwerke und steht in Wechselwirkung mit Signalwegen, die die Morphogenese prägen, darunter Wege, die die Bildung des Neuralrohrs und die Musterbildung der Mittellinie des Vorderhirns beeinflussen. Eine veränderte ZIC2-Aktivität ist mit angeborenen neuroentwicklungsbedingten Erkrankungen assoziiert, insbesondere mit der Holoprosenzephalie, und eine dysregulierte Expression wurde in Studien zur Tumorbiologie und zur Linienplastizität beschrieben. Als DNA-bindender transkriptioneller Regulator bietet Zic2 einen mechanistischen Ansatzpunkt zur Untersuchung der Enhancer-Promotor-Kontrolle, chromatinabhängiger Transkription und entwicklungsbezogener genregulatorischer Schaltkreise in menschlichen Zellen.

Das Zic2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ZIC2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ZIC2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ZIC2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Zic2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ZIC2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Zic2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ZIC2-Exone abzielen, die für die Zic2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ZIC2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Zic2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Zic2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ZIC2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Zic2 HDR-Plasmid (h) und Zic2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ZIC2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ZIC2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.