ZHX1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407666-ACT

Zinc-Finger- und Homeobox-Protein 1 (ZHX1) ist ein nukleärer Transkriptionsfaktor, der mehrere C2H2-Zinkfinger-Motive und Homeobox-Domänen enthält. Dadurch kann er sequenzspezifisch an DNA binden und Genexpressionsprogramme regulieren, die mit Zellschicksal und Differenzierung verknüpft sind. ZHX1 ist an Netzwerken der transkriptionellen Repression/Aktivierung beteiligt, indem es mit anderen nukleären Faktoren zusammenwirkt, um chromatinassoziierte Prozesse und linien-/zelltypspezifische Transkription zu modulieren. Eine veränderte ZHX1-Expression wurde in verschiedenen Krankheitskontexten beschrieben, darunter Krebs und immunbezogene Dysregulationen, was mit einer Rolle bei der Kontrolle von Proliferation, Apoptose und differenzierungsassoziierten Signalwegen vereinbar ist. Diese Eigenschaften machen ZHX1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung transkriptioneller Schaltkreise, epigenetischer Regulation und stressresponsiver Genexpression in menschlichen Zellmodellen.

ZHX1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZHX1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZHX1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZHX1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZHX1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZHX1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZHX1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZHX1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZHX1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZHX1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.