ZFYVE28 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412894

Descripción general

ZFYVE28 codifica una proteína que contiene un dominio FYVE y que reconoce el fosfatidilinositol 3-fosfato en las membranas endosomales, conectando la señalización de fosfoinosítidos con el tráfico de membranas y la clasificación de proteínas. A través de interacciones con componentes de la maquinaria endocítica, se ha implicado a ZFYVE28 en la regulación de la internalización de receptores, la maduración de endosomas y la organización espacial de complejos de señalización. Estos procesos se entrecruzan con vías que controlan el recambio de receptores de factores de crecimiento y la dinámica de señalización aguas abajo, lo que hace que ZFYVE28 sea relevante para estudios sobre la atenuación de la señal y el transporte vesicular. La desregulación del tráfico endosomal y de la clasificación dependiente de fosfoinosítidos se asocia con alteraciones de la homeostasis celular y se ha implicado en múltiples contextos relevantes para enfermedades, incluidos fenotipos proliferativos y neurobiológicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ZFYVE28 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ZFYVE28 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ZFYVE28 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ZFYVE28 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ZFYVE28.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ZFYVE28 para la investigación de la señalización de ZFYVE28, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ZFYVE28 críticos para la función de ZFYVE28
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ZFYVE28 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ZFYVE28 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ZFYVE28 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ZFYVE28. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ZFYVE28 (h) y el plásmido HDR ZFYVE28 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ZFYVE28 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ZFYVE28 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.