ZFP100 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-411821-ACT

Das humane Gen ZNF473 kodiert das Zinkfingerprotein ZFP100, einen mutmaßlich DNA-bindenden Transkriptionsregulator, der durch Zinkfinger-Domänen vom C2H2-Typ charakterisiert ist, die häufig mit der sequenzspezifischen Steuerung der Genexpression verknüpft sind. Durch die Modulation der Promotor- und Enhancer-Aktivität wird erwartet, dass ZFP100 chromatinabhängige Transkriptionsprogramme beeinflusst, die Zellidentität, Stressantworten und differenzierungsbezogene Signalwege prägen. Eine veränderte Regulation von Zinkfinger-Transkriptionsfaktoren ist häufig mit dysregulierten epigenetischen Zuständen und aberranten Signalnetzwerken assoziiert, was ZNF473 zu einem nützlichen Lokus macht, um Mechanismen der Transkriptionskontrolle in krankheitsrelevanten Kontexten zu untersuchen. Die Charakterisierung ZFP100-abhängiger Gennetzwerke kann Studien zur Umgestaltung von Signalwegen, zur Funktion regulatorischer Elemente und zu transkriptomischen Veränderungen in menschlichen Zellen unterstützen.

ZFP100 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZNF473-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZFP100 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZNF473-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZNF473-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZFP100-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZNF473-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZFP100-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZFP100-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZNF473-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.