ZEB CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400201-ACT

Humanes **ZEB1** kodiert das Zinkfinger‑E‑Box‑bindende Homeobox‑Protein **ZEB**, einen sequenzspezifischen Transkriptionsfaktor, der an E‑Box‑ähnliche Motive bindet, um genregulatorische Programme zu koordinieren, die den epithelial‑mesenchymalen Übergang (EMT), die Zellpolarität und die Differenzierung steuern. ZEB1 integriert Signale aus den TGF‑β/SMAD‑, Wnt/β‑Catenin‑, Notch‑ und MAPK‑Signalwegen und ist mit microRNA‑Netzwerken wie der miR‑200‑Familie verknüpft, um transkriptionelle Repression und Aktivierung zu modulieren. Eine veränderte ZEB1‑Aktivität ist häufig mit Änderungen der Zelladhäsion, Motilität und Linienplastizität assoziiert und ist daher relevant für Studien zu Fibrose, Entwicklungsstörungen und Tumorbiologie. Als zentraler Regulator EMT‑assoziierter transkriptioneller Zustände wird ZEB1 häufig als molekularer Knotenpunkt genutzt, um kontextabhängige Genexpressionsprogramme zu untersuchen.

ZEB1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZEB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZEB1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZEB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZEB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZEB1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZEB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZEB1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZEB1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZEB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.