Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZDHHC7 (h): sc-405072

Présentation

ZDHHC7 code une palmitoyltransférase de la famille DHHC qui catalyse la S‑palmitoylation des protéines substrats, une modification lipidique réversible qui régule l’association aux membranes, le trafic intracellulaire, la stabilité et la signalisation. En contrôlant la localisation, dépendante de la palmitoylation, de protéines de signalisation et d’adaptateurs, ZDHHC7 influence des processus tels que la signalisation proximale aux récepteurs, le transport vésiculaire et l’organisation des microdomaines membranaires. Une palmitoylation dérégulée a été associée à des altérations des voies de croissance et de survie, de la fonction des cellules immunitaires et de la physiologie neuronale, faisant de ZDHHC7 un nœud pertinent pour étudier les réseaux de lipidation post‑traductionnelle dans des contextes liés aux maladies. L’étude de ZDHHC7 aide à préciser comment la dynamique de la palmitoylation façonne les interconnexions entre voies et la protéostasie en situation de stress ou de conditions associées à la transformation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZDHHC7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZDHHC7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZDHHC7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZDHHC7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZDHHC7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZDHHC7 pour l'étude de la signalisation de ZDHHC7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZDHHC7 essentiels à la fonction de ZDHHC7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZDHHC7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZDHHC7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZDHHC7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZDHHC7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZDHHC7 plasmide HDR (h) et le ZDHHC7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZDHHC7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZDHHC7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.