Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZDHHC5: sc-411833-ACT

ZDHHC5 code une palmitoyltransférase de la famille DHHC qui catalyse la S‑palmitoylation de protéines associées aux membranes, régulant leur trafic, leur stabilité et leur compartimentation au niveau de la membrane plasmique et des systèmes endosomaux. En contrôlant des cycles dynamiques de lipidation, ZDHHC5 influence la transduction du signal, l’organisation des récepteurs synaptiques et immunitaires, ainsi que le remodelage du cytosquelette, avec des effets en aval sur l’adhésion et la migration cellulaires. Des réseaux de palmitoylation dérégulés impliquant ZDHHC5 ont été associés à une altération de la signalisation neuronale et à une modulation de voies oncogéniques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la neurobiologie et du comportement des cellules cancéreuses. En tant qu’enzyme localisée à la membrane, ZDHHC5 est fréquemment étudiée dans le contexte de la localisation des protéines, du transport vésiculaire et des voies de signalisation dépendantes de modifications post‑traductionnelles.

ZDHHC5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZDHHC5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZDHHC5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZDHHC5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZDHHC5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZDHHC5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZDHHC5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZDHHC5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZDHHC5 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZDHHC5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.