Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZCCHC14 (h): sc-411686

Présentation

ZCCHC14 code une protéine nucléaire à doigt de zinc de type CCHC impliquée dans des fonctions de liaison à l’ARN qui influencent la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique, notamment la stabilité et le processing de l’ARN. Elle a été associée à des voies contrôlant le métabolisme de l’ARN et la régulation de programmes d’expression génique qui façonnent l’homéostasie cellulaire. Des données émergentes relient ZCCHC14 aux interactions virus–hôte, ce qui concorde avec le rôle de facteurs liant le zinc et associés à l’ARN dans la régulation de l’utilisation des ARN viraux et des réponses du transcriptome de l’hôte. La dérégulation des protéines liant l’ARN et des réseaux de maturation/processing de l’ARN est largement pertinente pour la signalisation oncogénique et les transitions d’état cellulaire, ce qui fait de ZCCHC14 un point d’entrée utile pour des études mécanistiques dans ces contextes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZCCHC14 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZCCHC14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZCCHC14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZCCHC14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZCCHC14.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZCCHC14 pour l'étude de la signalisation de ZCCHC14, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZCCHC14 essentiels à la fonction de ZCCHC14
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZCCHC14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZCCHC14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZCCHC14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZCCHC14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZCCHC14 plasmide HDR (h) et le ZCCHC14 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZCCHC14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZCCHC14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.