Plásmido CRISPR de Activación (h) ZC3H4: sc-411693-ACT

ZC3H4 codifica una proteína de unión a ARN con dedo de zinc tipo CCCH implicada en la regulación postranscripcional, con funciones emergentes en el control del destino del ARN y del output transcripcional. Diversos estudios vinculan a ZC3H4 con el procesamiento de ARN nuclear y con programas de expresión génica que moldean transiciones del estado celular, incluidas la proliferación y la diferenciación. A través de interacciones con el ARN y con complejos proteicos reguladores, ZC3H4 está en posición de influir en vías que gobiernan la estabilidad de los transcritos y la vigilancia nuclear. La desregulación de factores de unión y procesamiento de ARN como ZC3H4 se asocia con frecuencia a firmas de expresión génica alteradas observadas en el cáncer y en otros trastornos que implican un metabolismo del ARN aberrante.

ZC3H4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZC3H4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZC3H4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZC3H4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZC3H4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZC3H4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZC3H4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZC3H4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZC3H4 en células tumorales con expresión de ZC3H4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.