Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZBTB4 (h): sc-404975

Présentation

ZBTB4 (protéine 4 contenant des doigts de zinc et un domaine BTB) est un régulateur transcriptionnel spécifique de séquence qui se lie à l’ADN CpG méthylé et contribue au contrôle épigénétique de l’expression génique. Grâce à son domaine BTB/POZ et à ses motifs « doigts de zinc », ZBTB4 participe à des programmes de répression associés à la chromatine qui influencent la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et les états transcriptionnels liés à la différenciation. Une expression ou une activité altérée de ZBTB4 a été associée à une prolifération dérégulée et à des phénotypes invasifs dans de multiples contextes cancéreux, ce qui concorde avec un rôle dans le maintien de l’homéostasie transcriptionnelle. En tant que facteur sensible à la méthylation, ZBTB4 est également pertinent pour des études reliant les profils de méthylation de l’ADN aux sorties transcriptionnelles en aval et à la stabilité du génome.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZBTB4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZBTB4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZBTB4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZBTB4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZBTB4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZBTB4 pour l'étude de la signalisation de ZBTB4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZBTB4 essentiels à la fonction de ZBTB4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZBTB4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZBTB4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZBTB4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZBTB4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZBTB4 plasmide HDR (h) et le ZBTB4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZBTB4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZBTB4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.