ZBP1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406434-ACT

ZBP1 (Z-DNA-bindendes Protein 1; auch bekannt als DAI) ist ein angeborener Immun-Sensor, der Nukleinsäuren in Z-Form erkennt und pathogen- oder schädigungsassoziierte Signale mit antiviralen und inflammatorischen Antworten koppelt. Nach Aktivierung geht ZBP1 RHIM-abhängige Interaktionen mit RIPK3 ein und kann Programme des regulierten Zelltods initiieren, einschließlich Nekroptose, wobei es zugleich in interferongetriebene transkriptionelle Netzwerke eingreift. Diese Signalachse integriert sich in Signalwege von Pattern-Recognition-Rezeptoren und moduliert die Zytokinproduktion sowie Entscheidungen über das Zellschicksal als Reaktion auf Virusinfektionen und zellulären Stress. Eine fehlregulierte ZBP1-Aktivität wurde mit aberranter Interferon-Signalgebung, inflammatorischer Pathologie und Virus–Wirt-Interaktionen in Verbindung gebracht, die für die Immunologie- und Zelltodforschung relevant sind.

ZBP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZBP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZBP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZBP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZBP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZBP1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZBP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZBP1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZBP1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZBP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.