Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZBP-89: sc-404898-ACT

Le gène humain **ZNF148** code le facteur de transcription à doigts de zinc de type Krüppel **ZBP-89**, une protéine se liant aux promoteurs riches en GC qui module les programmes transcriptionnels dépendants de l’ARN polymérase II contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et les réponses au stress cellulaire. ZBP-89 peut agir comme activateur ou répresseur selon le contexte du promoteur et le recrutement de cofacteurs, influençant l’état de la chromatine et l’initiation de la transcription de gènes impliqués dans le contrôle de la croissance et l’apoptose. Par ses rôles dans la régulation transcriptionnelle, ZBP-89 interfère avec des voies gouvernant l’homéostasie épithéliale et la spécification des lignages, ce qui le rend pertinent pour l’étude de la prolifération dérégulée et des réseaux transcriptionnels associés aux tumeurs. Des altérations de l’activité de ZNF148 ont été étudiées dans le contexte de la biologie du cancer et de la signalisation inflammatoire, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour la recherche sur la régulation génique et la fonction des promoteurs.

ZBP-89 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZNF148 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZBP-89 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZNF148 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZNF148, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZBP-89. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZNF148 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZBP-89 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZBP-89 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZNF148 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.