ZAR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406501

Übersicht

ZAR1 (zygote arrest 1) kodiert ein RNA-bindendes Protein, das vor allem für seine Funktionen in der frühen Embryogenese bekannt ist, wo es den Übergang von der Oozyte zur Zygote sowie die posttranskriptionelle Kontrolle maternaler mRNAs unterstützt. In menschlichen Zellen wird ZAR1 mit der Regulation von mRNA-Stabilität und -Translation sowie mit der Dynamik zytoplasmatischer Ribonukleoprotein-Granula in Verbindung gebracht – Prozesse, die den Zellzyklusverlauf und die Entwicklungskompetenz prägen. Eine veränderte Expression oder Fehlregulation maternaler Effektoren und keimbahnassoziierter RNA-regulatorischer Faktoren wurde in Modellsystemen mit Infertilitätsphänotypen und Entwicklungsversagen assoziiert, was ZAR1 für Studien der Reproduktionsbiologie und früher Entwicklungsprogramme relevant macht. Als maternal angereicherter Faktor stellt ZAR1 zudem einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um zu untersuchen, wie RNA-Regulationsnetzwerke mit Stressantworten und Differenzierungsprogrammen zusammenwirken.

Das ZAR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ZAR1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ZAR1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ZAR1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZAR1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ZAR1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZAR1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ZAR1-Exone abzielen, die für die ZAR1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ZAR1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZAR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ZAR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ZAR1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZAR1 HDR-Plasmid (h) und ZAR1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ZAR1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ZAR1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.