ZADH2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408358

Descripción general

ZADH2 (proteína 2 que contiene un dominio de deshidrogenasa alcohólica con motivo de unión al zinc) codifica una oxidoreductasa putativa que presenta un motivo de unión al zinc similar al de las deshidrogenasas alcohólicas, lo que sugiere un papel en la química redox y el metabolismo celular. Como miembro de un panorama más amplio de deshidrogenasas/reductasas, se espera que ZADH2 influya en procesos enzimáticos dependientes de cofactores que se solapan con el manejo de lípidos y aldehídos, las respuestas al estrés oxidativo y la homeostasis metabólica mitocondrial o citosólica. La variación en la actividad de enzimas redox y metabólicas se asocia con frecuencia a cambios en la proliferación, la diferenciación y la adaptación al estrés en tejidos humanos, lo que convierte a ZADH2 en una diana relevante para estudios mecanísticos sobre la reprogramación metabólica y el control del estado celular. La investigación en curso sobre la expresión y función de ZADH2 en distintos contextos tisulares respalda su uso en investigación centrada en vías, más que en un único modelo específico de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ZADH2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ZADH2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ZADH2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ZADH2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ZADH2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ZADH2 para la investigación de la señalización de ZADH2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ZADH2 críticos para la función de ZADH2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ZADH2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ZADH2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ZADH2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ZADH2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ZADH2 (h) y el plásmido HDR ZADH2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ZADH2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ZADH2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.