Y+LAT1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404403

Descripción general

SLC7A7 codifica Y+LAT1, una subunidad de cadena ligera del sistema heteromérico de transporte de aminoácidos y+L que se asocia con SLC3A2 (4F2hc/CD98) para mediar el intercambio de aminoácidos catiónicos como la lisina y la arginina por aminoácidos neutros a través de la membrana plasmática. Esta actividad de transporte contribuye al balance celular de nitrógeno y vincula la disponibilidad de aminoácidos con la homeostasis metabólica y los procesos de detección de nutrientes. La función de Y+LAT1 es especialmente relevante en contextos epiteliales e inmunitarios, donde el flujo de aminoácidos influye en el crecimiento y en las salidas de señalización. La alteración patogénica de SLC7A7 se asocia con la intolerancia lisinúrica a las proteínas, lo que conecta los defectos de transporte dependientes de Y+LAT1 con un desequilibrio sistémico de aminoácidos y complicaciones inflamatorias posteriores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Y+LAT1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC7A7 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC7A7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC7A7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Y+LAT1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC7A7 para la investigación de la señalización de Y+LAT1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC7A7 críticos para la función de Y+LAT1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC7A7 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Y+LAT1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Y+LAT1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC7A7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Y+LAT1 (h) y el plásmido HDR Y+LAT1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC7A7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC7A7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.