YB-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401385-ACT

YBX1 codifica la proteina umana Y-box binding protein 1 (YB-1), un fattore multifunzionale di legame a DNA/RNA che regola la trascrizione, lo splicing dell’mRNA, la traduzione e la dinamica dei granuli di stress. YB-1 partecipa alle risposte cellulari allo stress e influenza il controllo del ciclo cellulare, l’apoptosi e la segnalazione del danno al DNA attraverso un ampio controllo dei programmi di espressione genica. È stata collegata a vie che governano la proliferazione e la segnalazione infiammatoria, inclusa la modulazione di reti trascrizionali oncogeniche e la regolazione post-trascrizionale di trascritti legati alla crescita. Un’attività deregolata di YBX1/YB-1 è frequentemente associata alla biologia tumorale, a fenotipi correlati alla metastasi e alla resistenza allo stress cellulare, rendendola un bersaglio chiave per studi meccanicistici sulla regolazione genica e la proteostasi.

YB-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di YBX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

YB-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus YBX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione YBX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di YB-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus YBX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da YB-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via YB-1 nelle cellule tumorali con espressione di YBX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.