Plasmide CRISPR d'Activation (h) XylT-II: sc-404853-ACT

Le gène humain **XYLT2** code la **xylosyltransférase II** (XylT-II), une glycosyltransférase résidente du Golgi qui catalyse le transfert initial d’un xylose sur des résidus sérine spécifiques des protéines cœur des protéoglycanes, amorçant ainsi l’assemblage des chaînes de glycosaminoglycanes (GAG). Cette étape précoce soutient l’organisation de la matrice extracellulaire et influence des voies liées à l’adhésion cellulaire, à la mécanotransduction et à la signalisation des facteurs de croissance via les protéoglycanes à héparane sulfate et à chondroïtine/dermatane sulfate. L’activité de **XYLT2** contribue donc à la biosynthèse des protéoglycanes et à des réseaux plus larges de glycosylation qui façonnent l’architecture tissulaire et la communication intercellulaire. Des altérations génétiques des voies d’assemblage des protéoglycanes impliquant **XYLT2** ont été associées à des phénotypes du tissu conjonctif et du squelette, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie de la matrice et des mécanismes des maladies liées à la glycosylation.

XylT-II Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de XYLT2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

XylT-II Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus XYLT2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription XYLT2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de XylT-II. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus XYLT2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de XylT-II au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie XylT-II dans les cellules tumorales présentant une expression de XYLT2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.