Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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XRCC4 Double Nickase Plasmid (m): sc-430821-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das XRCC4 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- XRCC4 Double-Nickase-Plasmid (m) und XRCC4 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Xrcc4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: XRCC4: sc-365118
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
XRCC4 Double Nickase Plasmid (m) | sc-430821-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Xrcc4 kodiert XRCC4, ein zentrales Gerüstprotein des nicht-homologen End-Joinings (NHEJ), eines Reparaturwegs für DNA-Doppelstrangbrüche, die durch ionisierende Strahlung, oxidativen Stress und programmierte Rekombinationsereignisse entstehen. XRCC4 bildet einen funktionellen Komplex mit DNA-Ligase IV und interagiert mit XLF/NHEJ1, um gebrochene DNA-Enden auszurichten und zu ligieren; dadurch wird die Genomstabilität erhalten und ein ordnungsgemäßer Zellzyklusverlauf unterstützt. Eine Störung des XRCC4-abhängigen End-Joinings beeinträchtigt die chromosomale Integrität und erhöht die Empfindlichkeit gegenüber genotoxischem Stress, was die XRCC4-Funktion mit Mechanismen verbindet, die der krebsassoziierten genomischen Instabilität zugrunde liegen. Xrcc4 ist außerdem für Studien zur Entwicklung des Immunsystems relevant, da NHEJ für die V(D)J-Rekombination und die Diversifizierung von Antigenrezeptor-Genen erforderlich ist.
XRCC4 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Xrcc4-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Xrcc4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Xrcc4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Xrcc4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.