XRCC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403531

Übersicht

XRCC2 kodiert ein RAD51-Paralog, das an der homologen Rekombination (HR) zur Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen beteiligt ist, indem es die Assemblierung und Stabilisierung des RAD51-Filaments während der Stranginvasion unterstützt. Das Protein ist wesentlich für die Aufrechterhaltung der Integrität von Replikationsgabeln und für die Bewältigung von DNA-Schäden, die durch Replikationsstress entstehen, und ist funktionell eng mit dem Fanconi-Anämie-Signalweg sowie übergeordneten Netzwerken der Genomstabilität verknüpft. Eine Störung von XRCC2 beeinträchtigt die HR-Kapazität, erhöht die chromosomale Instabilität und steigert die Empfindlichkeit gegenüber DNA-Crosslinking-Wirkstoffen, wodurch eine XRCC2-Dysfunktion mit Krebsprädisposition und entsprechenden Phänotypen einer DNA-Reparaturdefizienz in Verbindung gebracht wird. Als zentraler HR-Faktor wird XRCC2 häufig in Studien zu Mechanismen der Genomstabilität, Mutationsprozessen und der Signalgebung der DNA-Schadensantwort untersucht.

Das XRCC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des XRCC2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des XRCC2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von XRCC2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die XRCC2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von XRCC2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der XRCC2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf XRCC2-Exone abzielen, die für die XRCC2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere XRCC2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom XRCC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom XRCC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des XRCC2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das XRCC2 HDR-Plasmid (h) und XRCC2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von XRCC2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten XRCC2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.