Plásmido CRISPR de Activación (h) xCT: sc-401920-ACT

El gen humano SLC7A11 codifica xCT, la subunidad de cadena ligera del sistema xC⁻ que media la importación de cistina independiente de sodio a cambio de glutamato intracelular. Al aportar cistina para la síntesis de glutatión, xCT sostiene la homeostasis redox celular, la detoxificación de especies reactivas de oxígeno y el acoplamiento metabólico entre el transporte de aminoácidos y la capacidad antioxidante. SLC7A11 está regulado por programas sensibles al estrés como NRF2 y la señalización integrada del estrés, lo que lo vincula con la sensibilidad a la ferroptosis y con un metabolismo más amplio de tioles. La actividad desregulada de xCT se ha asociado con alteraciones en el manejo del estrés oxidativo y con la reprogramación metabólica observada en múltiples contextos relevantes para la enfermedad, incluida la biología tumoral y los procesos neuroinflamatorios.

xCT El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC7A11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

xCT El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC7A11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC7A11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de xCT. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC7A11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de xCT en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía xCT en células tumorales con expresión de SLC7A11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.